谷氨酰胺酶测定试剂盒 微量法-有机试剂-试剂-生物在线
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谷氨酰胺酶测定试剂盒 微量法

谷氨酰胺酶测定试剂盒 微量法

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产品名称: 谷氨酰胺酶测定试剂盒 微量法

英文名称: Micro Glutaminase(GLS)Assay Kit

产品编号: BC1455

产品价格: 0

产品产地: 北京市通州区马驹桥联东U谷85A三

品牌商标: Solarbio

更新时间: 2025-01-03T10:07:38

使用范围: null

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产品内容:

试剂一液体120mL×1瓶,4 ℃保存;

试剂二:液体40 mL×1瓶,4 ℃保存;

试剂三:液体60 mL×1瓶,常温保存;

试剂四:液体1.5 mL×1支,常温保存;

试剂五:液体3 mL×1瓶,常温避光保存

标准品:液体1mL×1支,100μmol/mLNH4+,常温保存

产品说明:

GLSEC3.5.1.2存在于高等动物和某些细菌以及植物根中,催化谷氨酰胺水解成谷氨酸和氨,在氮素代谢中具有重要调控作用,尤其是调节游离氨含量和尿素代谢。

GLS催化谷氨酰胺水解成L-谷氨酸和氨,利用奈氏试剂检测氨增加的速率,即可计算其酶活性。

需自备的仪器和用品:

    台式离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、可调式移液枪、研钵、冰和双蒸水。

 

操作步骤:

一、粗酶液提取:

称取约0.1g组织,加入1mL试剂一冰浴研磨,于4  8000 g离心10min,取上清,作为待测液(粗酶液)。

二、标准曲线绘制

50μL标准液加入450μL蒸馏水中,制备10μmol/mL标准溶液,然后稀释成10.80.40.20.10.050.0250μmol/mL标准液

 

三、测定步骤:

1、分光光度计预热30min以上,调节波长至420nm,蒸馏水调零。

2、样品测定(在EP管中加入下列试剂)

 

试剂名称(uL

测定管

对照管

标准管

上清液

100

-

-

蒸馏水

-

100

-

试剂一

25

25

-

试剂二

400

400

-

混匀,37℃水浴1 小时

试剂三

525

525

-

混匀,8000 g,常温离心10 min;取上清液,在EP管或96孔板中加入下列试剂

上清液

130

130

-

标准液

-

-

130

试剂四

10

10

10

试剂五

20

20

20

蒸馏水

40

40

40

 

混匀,420nm处读取吸光值A,计算ΔA=A测定管-A对照管。对照管只要做一管

分别测定0.40.20.10.050.0250μmol/ml标准液在420nm下的吸光度(A),计算ΔA=A-A00μmol/ml下的吸光度)以ΔAy轴,标准液浓度为x轴绘制标准曲线,测定的回归方程为y=kx+b

四、酶活性计算

1、 ΔA带入回归方程中计算出x

2、谷氨酰胺酶活性计算:

1)按样本蛋白浓度计算:

单位定义:37下每mg蛋白质每小时催化谷氨酰胺生成1μmol 氨定义为一个酶活力单位。TUNEology 波长可调检测卡盒-->