miRNA qPCR染料法预混液
产品名称： miRNA qPCR染料法预混液
英文名称： 2× miRNA qPCR Fluore Green Master Mix
产品编号： N132039
产品价格： null
产品产地： 美国
品牌商标： Arcegen
更新时间： 2025-05-20T14:15:52
使用范围： null
| 规格 | 价格 |
| 100T（20μL/rxn)-2ml | 250.0 |
| 500T（20μL/rxn)-10ml | 1200.0 |
- 联系人 : 钟珍
- 地址 : 申江南路4388号1幢2层208室
- 邮编 : 201314
- 所在区域 : 上海
- 电话 : 139****6764 点击查看
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- 邮箱 : zhongz@magibagbio.com
- 二维码 : 点击查看
R仪器，无需在不同的仪器上调整ROX浓度。DNA Polymerase采用化学修饰的热启动聚合酶，配合特殊的Buffer体系，使反应特异性更好，灵敏度更高，并能在更广的范围内进行准确定量。
本产品必须与本公司的miRNA一链cDNA合成反转录试剂盒（加尾法，用于qPCR）(Cat#N132068)配套使用，以获得最终的实验结果。
产品信息
|
货号 |
N132039E |
N132039S |
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规格 |
100 T（20 μL/rxn） |
500T（20 μL/rxn） |
组分信息
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组分编号 |
组分名称 |
N132036E |
N132036S |
|
N132039-A |
2×miRNA qPCR Master Mix |
1 mL |
5×1 mL |
|
N132039-B |
RNase-free H2O |
2×1 mL |
5×1 mL |
储存条件
冰袋运输。-20℃避光保存，有效期1年。
注意事项
1. 使用前，将冻存的各组分充分融解并轻轻混匀后使用。
2. 实验时，请尽量使用无污染的耗材，避免污染。
3. 本产品避免反复冻融，配制时应避免强光照射。
4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
5. 本产品仅用于科研。
使用说明
1. 体系配制
（1）将试剂放置室温下融化，使用前上下颠倒，轻轻混匀，并轻微离心后使用，避免起泡。
（2）将试剂置于冰上，按照下表配制试剂。RNase-free H2O可替换为其他用于分子生物学实验的无核酸酶水。
【注】：没有混匀试剂、使用振荡器混匀、未在冰上配置试剂等会导致反应性能下降。
1) 荧光定量PCR体系配制
|
组分 |
体积 (μL) |
体积 (μL) |
终浓度 |
|
2×miRNA qPCR Master Mix |
10 μL |
25 μL |
1 × |
|
Forward Primer（自备） |
X |
X |
400 nM |
|
Reverse Primer (10 μM) |
0.8 μL |
2 μL |
400 nM |
|
cDNA |
X |
X |
- |
|
RNase-free H2O |
Up to 20 μL |
Up to 50 μL |
- |
【注】：1) miRNA第一链cDNA的加入量不要超过qRT-PCR体积的1/10。高浓度cDNA易导致非特异扩增，可对cDNA适当稀释10-1000倍。2) Reverse Primer (10 μM) 来源于试剂盒N132068。由于专利的保密性，miRNA加A法反转录后，cDNA下游引物序列不同厂商之间存在差异，建议使用试剂盒N132068，以保证最终的实验结果。
2. PCR反应程序设置
可参考以下两个程序进行定量PCR反应。
a. 荧光定量PCR常规扩增程序（两步法）
|
循环步骤 |
温度 |
时间 |
循环数 |
|
预变性 |
95℃ |
10 min |
1 |
|
变性 |
95℃ |
15 sec |
35-40 |
|
退火/延伸 |
60℃ |
20 sec |
|
|
熔解曲线阶段 |
仪器默认设置 |
1 |
|
b. 荧光定量PCR快速扩增程序（两步法）
|
循环步骤 |
温度 |
时间 |
循环数 |
|
预变性 |
95℃ |
10 sec |
1 |
|
变性 |
95℃ |
5 sec |
40 |
|
退火/延伸 |
60℃ |
20 sec |
|
|
熔解曲线阶段 |
仪器默认设置 |
1 |
|
【注】：1）退火/延伸温度和时间可根据实验要求适当调整。2）常规程序与快速程序根据实验仪器选择，例如：ABI QuantStudio 5等仪器可以进行快速程序设置，Bio-Rad CFX96等仪器不可设置快速程序，需要进行常规程序设置。