碱性磷酸酶染色液(偶氮偶联法)
品牌：Solarbio | 货号：G1480
产品组成
自备材料
1、载玻片、湿盒
2、普通光学显微镜
产品介绍
碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase，简称 ALP 或 AKP)为一类***酶，广泛分布于哺乳动物组
织内，其活性所需最适 pH 9.2~9.8。此酶主要存在于物质交换活跃之处(细胞膜)，如肠上皮和肾近曲
小管的刷状缘、附睾上皮之静纤毛、肝的毛细胆管膜以及微动脉和毛细血管动脉部之内皮，还见于
内质网、高尔基复合体、吞饮小泡、肠上皮之溶酶体、中性粒细胞之中性颗粒以及平滑肌之细胞膜。
碱性磷酸酶染色液(偶氮偶联法)不是采用金属沉淀法来显示碱性磷酸酶活性，而是采用偶氮偶
联法(又称同时偶联法)，其原理是在 pH9.2～9.8 的碱性条件下，细胞内碱性磷酸酶可使 AB-BI 磷酸
盐水解，释放出磷酸与萘酚，后者与偶联重氮盐生成有色产物，定位于细胞质中。该染液可用于血
液、骨髓或细胞涂片、冰冻切片、梯度入水后的石蜡切片等的碱性磷酸酶染色，碱性磷酸酶活性部
位呈蓝色，位于胞桨，结果较金属盐沉淀法可靠。
操作步骤（仅供参考）
一、 涂片或切片
1、 血液、骨髓或细胞涂片、冰冻切片、石蜡切片入ALP固定液固定3min(梯度入水后的石蜡切片无
需固定)，水洗。
2、 滴加配制好的 ALP 孵育液，放入湿盒中，避光孵育 15～20min，水洗。
3、 入核固红染色液或甲基绿染色液复染 3～5min。
4、 水洗、镜检或甘油明胶封固后镜检。
二、 贴壁培养细胞
1、 取6孔板或其他容器培养的细胞，弃液，PBS清洗干净
2、 加入ALP固定液固定3min或4%多聚甲醛固定10～15min，PBS清洗。
3、 滴加配制好的 ALP 孵育液，放入湿盒中，避光孵育 15～20min，PBS 清洗。
4、 入核固红染色液或甲基绿染色液复染 3～5min。
5、 PBS 清洗、镜检。
染色结果：
ALP 活性部位 蓝色
细胞核 红色(核固红)或绿色(甲基绿)
血液、骨髓涂片
结果判断：
一般以积分报告结果，根据 100 个中性粒细胞阳性颗粒进行 0-4 计分。
细胞分值
染色特点
0 无颗粒
1 稍有颗粒
2 中等程度颗粒
3 多数颗粒
4 充满颗粒
注意事项
1. 血液或骨髓细胞涂片或其他样本均应新鲜，薄厚适宜，及时固定，否则会影响酶的活性。
2. 培养细胞染色操作过程中，清洗、染色等步骤都应轻微，以免损伤或丢失细胞。
3. ALP 孵育液易失效或降低阳性强度，即配即用，不宜久置。
4. 复染时，核固红染色液或甲基绿染色液二者取其一。
5. 每次染色时，应有阳性对照片。