目的
展示UNIFI™ 科学信息系统的强大功能如何帮助用户查看和审核UPLC®/MS或UPLC/MSE肽图分析实验获得的LC/MS原始数据。
背景
肽图分析是药物蛋白鉴定的基本工具，可监测蛋白药物结构新变体，并对已知变体的变化程度进行监测。利用高分辨质谱检测进行肽图分析可得到非常丰富的蛋白药物数据信息，从中获得关键数据结果是非常有挑战性的。
专为UPLC/MS肽图分析设计的软件工作流程，如基于MassLynx™ 软件的BiopharmaLynx™和基于UNIFI的沃特世生物制药系统解决方案
中的UPLC/MS肽图流程，可大大缩短数据处理时间，且不需要人工查看数据组。然而，分析工作者在得到软件处理后的数据结果后，还往往需要重新查看色谱、质谱的原始数据，以便对重要的数据结果进行验证，有时这也是实验室SOPs的要求。UNIFI科学信息系统可满足管理生物制药工作流程的需要，具有更强大的功能来支持用户的验证流程。

简化了结果的验证过程、将实验室操作流程标准化，缩短了从数据采集到产品决策的时间。

图 1. UNIFI中的Review功能选项可以查看处理后的UPLC/MSE肽图分析数据结果中某个肽段的信息。

图 2. UNIFI中的Investigate功能选项允许查看UPLC/MSE原始数据中的每个肽段的信息，还可以进行开放式分析。

解决方案

采集蛋白质烯醇酶I(来自S. cerevisiae)的UPLC/MSE肽图数据(120分钟，梯度洗脱)。利用UNIFI UPLC/MS肽图工作流程进行数据处理，利用典型参数设置(<10 ppm质量精度，胰蛋白酶、半胰蛋白酶及单一错切偏差多肽归属，可能产生天冬酰胺脱酰氨基作用和蛋氨酸氧化)。

前页的图-1是处理后的肽图结果，在UNIFI Review功能选项中该数据组以截屏图像的形式显示出来。Review选项可提供主要数据表和不同图形显示窗口之间处理结果的互动导航。图中，T6胰酶水解肽段在色谱图窗口中在基峰强度（BPI）图谱中突出显示(保留时间约 54.75 min)出来，相关的MSE质谱数据再Fragment Viewer窗口显示。可利用该信息及表格结果迅速确定所产生的自动峰归属是否正确。

对于一些意料之外的结果，用户可进一步挖掘原始数据，以验证得到的定量和定性分析结果。打开Investigate功能选项卡（见前页图-2）即可出现直接由UPLC/MS原始数据产生的色谱和质谱结果的图形和表格显示区。

这些视图还支持用户进行开放式研究，如：提取某些特定质量的峰、谱图加和、运用背景校正等。反之，可通过处理后的某个峰来分析其对应的原始数据。为使该图简单化，选定相同的T6肽段进行更进一步研究。

♦ 图2中的三维图形浏览工具（左上、二维视图、2+离子智能变焦）表明这个峰的质谱数据中没有任何干扰，并突出显示了2+离子的同位素峰检测结果。
♦更为重要的是，T6相关的提取离子色谱图（左下）、加和图谱（右上、右中）和处理后的质谱鉴定数据（右下）都可通过使用与组成窗口有关的可选择命令自动生成（图-3）。
♦对UPLC/MS原始数据中的各个峰进行分析的功能不仅可缩短用户查看其它图谱进行结果验证的时间，还可将实验室进行肽图分析的过程标准化。

图 3. 对于每个检测到的峰，提取质谱图、加和谱图以及相关的处理后质谱图均可自动生成。

总结
科学家能够在处理后的数据下面自由进行原始数据的查看和再处理是对复杂生物药物UPLC/MS数据分析应用软件的基本要求。UNIFI科学信息系统的功能远远超过这个基本要求，它利用肽图分析中检测到的肽段数据，自动产生有意义的色谱和质谱原始数据的视图。这个平台简化了结果的验证过程、将实验室操作流程标准化，缩短了从数据采集到产品决策的时间。